培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號16000-044),15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
大鼠小腦顆粒細胞提取物是從大鼠原代小腦顆粒細胞提取的,大鼠原代小腦顆粒細胞從正常大鼠腦組織制備。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠小腦顆粒組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。
產品名稱 | 大鼠小腦顆粒細胞提取物 |
英文名稱 | Rat Brain: Normal Cerebellar Granule Cells Derivatives |
貨號 | CS-X3797 |
細胞分類:
一種:
是凍存產品,由氮直液接拿出,干冰運輸給客戶。一般不推薦這種,也較少使用這種方式,因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,一旦細胞狀態(tài)不好,很難說是細胞自身不行,還是復蘇沒操作好;另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大,也不是細胞儲存的方式,快遞時間也很難控制,多種因素影響產品的質量;干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種:
是我們復蘇好細胞,QC通過后,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,排除復蘇造成影響,常溫運輸也對細胞影響也不大,只需加25元運費(順豐)。
質量保證:我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產品全部經過QC檢測,進口來源,保證5代以內,活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
以下是公司正在銷售的相關產品:
0.094ng/ml4-Ethylphenol;4-基苯酚/對基苯酚人和肽素(CPP)Polyclonal Antibody
1.875ng/mlp-Hydroxybenzaldehyde;對羥基苯醛 人膜聯(lián)蛋白-A3 Polyclonal Antibody
0.094ng/mlMethyl myristate;豆蔻酯人膜聯(lián)蛋白A1( Annexin A1)Polyclonal Antibody
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0.938ng/ml(−)-Epicatechin gallate/ECG;表兒茶素沒食子酯人晚期糖基化終末產物(AGEs)Polyclonal Antibody
9.375pg/mlPristimerin;扁塑藤素人載脂蛋白C1(APO-C1)Polyclonal Antibody
0.094ng/mlGriseofulvin;灰黃人Atonal蛋白的同源蛋白1(ATOH1)ELISA 試盒
0.375ng/mlSarsasapogenin;菝葜皂苷元人芳基酯酶A(ASA)Polyclonal Antibody
0.094ng/mlPyruvic acid;人酰輔酶A酰轉移酶1(ACAT1)Polyclonal Antibody
大鼠小腦顆粒細胞提取物Ⅲ型膠原(COL3)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)考馬斯亮藍R250
白介素10(IL10)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)考馬斯亮藍G250
白介素18(IL18)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)酚藍
白介素1β(IL1β)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)固藍B
白介素2(IL2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)氯化硝基四唑藍
白介素4(IL4)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)苯胺藍O
白介素6(IL6)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)阿利新藍8GX
白介素8(IL8)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)四唑藍;BT
表皮生長因子(EGF)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)噻唑藍;MTT
促生長激素釋放激素(GHRH)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)苯胺藍(水溶)
干擾素γ(IFNγ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
基質金屬蛋白酶9(MMP9)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)亮藍
內皮素1(EDN1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)索非那新琥珀鹽
腦鈉素(BNP)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)結晶紫
生長激素(GH)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)結晶紫(進口)
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